| | To Limulus Amebocyte Lysate (LAL) είναι ένα υδατικό εκχύλισμα κυττάρων αίματος (αμοιβαδοκύτταρα) από το horseshoe crab, Limulus polyphemus. Το LAL αντιδρά με βακτηριακές ενδοτοξίνες ή λιποπολυσακχαρίτες (LPS), οι οποίες είναι συστατικό των εξωτερικών μεμβρανών των αρνητικών κατά Gram βακτηριών, καθώς και με τον πολυσακχαρίτη 1,3-β-D-glucan ο οποίος είναι χαρακτηριστικός ως συστατικό του κυτταρικού τοιχώματος των μυκήτων. Αυτή η αντίδραση είναι η βάση του LAL test, το οποίο χρησιμοποιείται για την ανίχνευση και ποσοτικοποίηση βακτηριακών ενδοτοξινών και του πολυσακχαρίτη 1,3-β-D-glucan. |
Υπάρχουν τρεις μέθοδοι για τα LAL Test: Gel Clot assay, Turbitimetric assay και Chromogenic assay. Οι δύο τελευταίες μπορούν να ταξινομηθούν ως φωτομετρικές μέθοδοι γιατί απαιτείται η ύπαρξη φωτομέτρου για την διεξαγωγή της ανάλυσης. - Gel Clot assay: Είναι η απλούστερη δοκιμή LAL. Ο σχηματισμός πηκτώματος (Gel Clot) υποδηλώνει την παρουσία ενδοτοξίνης σε ένα δείγμα. Η μέθοδος εκτελείται σε μικρούς ειδικούς σωλήνες δοκιμής και διαβάζεται με το χέρι αναστρέφοντας τους σωλήνες. Η μεγιστή ευαισθησία είναι 0.03 ΕU/mL. Η Associates of Cape Cod παρέχει μια μεγάλη γκάμα προϊόντων με διάφορες ευαισθησίες όπως 0.03 ΕU/mL, 0.06 ΕU/mL, 0.125 ΕU/mL και 0.25 ΕU/mL.
- Chromogenic assay (Kinetic/Endpoint): Το LAL αντιδραστήριο είναι εφοδιασμένο με ένα συνθετικό υπόστρωμα (para Nitroaniline) που δίνει κίτρινο χρώμα όταν απελευθερώνεται λόγω της ύπαρξης ενδοτοξίνης στο δείγμα. Η ανάλυση πραγματοποιείται με τη χρήση φωτομέτρου και διαβάζεται στα 405 nm. Αποτελεί μία ποσοτική μέθοδο και η μέγιστη ευαισθησία είναι 0.001 EU/mL. Η Associates of Cape Cod διαθέτει δύο προϊόντα για την μέθοδο αυτή το Chromo-LAL (kinetic Chromogenic assay με μεγ. ευαισθησία 0,005 EU/ml με χρήση ενός incubating plate reader) και το Pyrochrome (kinetic/endpoint assay με μεγ. ευαισθησία 0,001 EU/ml με τη χρήση του αναλυτή Pyros Kinetix Flex).
- Turbidimetric assay (Kinetic): Είναι ανάλυση παρόμοια με την Gel Clot μόνο που σε αυτή την περίπτωση, η διαδικασία που προηγείται του σχηματισμού πηκτώματος παρακολουθείται κατά τη διάρκεια που πραγματοποιείται με απορρόφηση στο οπτικό φάσμα στα 660 nm. H μέγιστη ευαισθησία της μπορεί να είναι 0.001 EU/mL αν χρησιμοποιηθεί το Pyros Kinetix Flex με το αντιδραστήριο της Associates of Cape Cod Pyrotell-T.
- Control Standard Endotoxin: Φιαλίδια ενδοτοξίνης για τη χρησιμοποιήση ως στάνταρ για τον έλεγχο της ενδοτοξίνης.
|