Εισαγωγή στα LAL test Τα Limulus Amebocyte Lysate (LAL) tests χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση και ποσοτικοποίηση των βακτηριακών ενδοτοξινών που προκύπτουν από την εξωτερική μεμβράνη των κατά gram αρνητικών βακτηρίων. Το βασικό συστατικό των LAL αντιδραστηρίων ππου χρησιμοποιείται στα test ενδοτοξινών προέρχεται από τα κύτταρα αίματος (αμοιβαδοκύτταρα) του horseshoe crab, Limulus polyphemus. Περιέχει τις πρωτεΐνες από τον μηχανισμό πήξης του αίματος που ενεργοποιείται από ενδοτοξίνες. Τα LAL αντιδραστήρια χρησιμοποιούνται κυρίως για την ανίχνευση ενδοτοξινών στα ενέσιμα προϊόντα, βιολογικά προϊόντα και ιατρικές συσκευές. Επίσης βρίσκουν εφαρμογή στις κλινικές αιμοκάθαρσης και σε μια ευρεία κλίμακας άλλων εφαρμογών. Τα LAL tests περιγράφονται στο κεφάλαιο Bacterial Endotoxins Test στην United States Pharmacopeia (Chapter <85>) και στο αντίστοιχο κεφάλαιο της the European Pharmacopoeia (Chapter 2.6.14) and the Japanese Pharmacopoeia (General Tests, No. 4.01). Μέθοδοι LAL test Υπάρχουν τρεις βασικές LAL test μέθοδοι: ανάλυση Gel-Clot (Gel Clot assay), ανάλυση Turbidimetric (Turbidimetric assay) και ανάλυση Chromogenic (Chromogenic assay). Οι τελευταίες δύο μπορούν να ταξινομηθούν μαζί ως φωτομετρικές μέθοδοι καθώς για την διεξαγωγή τους απαιτείται ένα φωτόμετρο. Επιλογή μεθόδου LAL Πριν αποφασίσουμε για την επιλογή LAL μεθόδου πρέπει να απαντήσουμε τις παρακάτω ερωτήσεις: - Ποιο είναι το διατιθέμενο κεφάλαιο;
- Ποιες είναι οι απαιτήσεις με βάση τους ισχύοντες κανονισμούς; (αν υπαγόμαστε σε κάποιους με βάση την εφαρμογή)
- Ποιος είναι ο τύπος του προϊόντος που θα εξεταστεί;
- Ποια ευαισθησία test απαιτείται; (Ποιο είναι το όριο ενδοτοξίνης για το δείγμα;)
- Απαιτείται ηλεκτρονική αποθήκευση δεδομένων;
Εαν το κεφάλαιο είναι περιορισμένο, η Gel-Clot μέθοδος είναι η λιγότερο δαπανηρή μέθοδος καθώς δεν απαιτείται φωτόμετρο. Επίσης, η Gel-Clot μέθοδος ίσως είναι η καλύτερη επιλογή για θολά δείγματα, εναιωρήματα ή χρωματιστά δείγματα όταν η αραίωση δεν απαλείφει την παρεμβολή στις φωτομετρικές μεθόδους. Για χρήστες με ένα non-incubating optical reader, η ανάλυση τελικού σημείου Chromogenic (endpoint Chromogenic assay) ίσως να είναι η καλύτερη επιλογή. Όπως και με τις άλλες φωτομετρικές μεθόδους, παρέχονται έτοιμες φόρμες αποτελεσμάτων για εκτύπωση και ηλεκτρονική αποθήκευση δεδομένων. Οι κινητικές μέθοδοι (Chromogenic και Turbidimetric) παρέχουν την μεγαλύτερη κλίμακα ανίχνευσης και εξειδικευμένου λογισμικού. Οι φωτομετρικές μέθοδοι προσφέρουν την μεγαλύτερη ευαισθησία επιτρέποντας την ανίχνευση χαμηλών συγκεντρώσεων ενδοτοξίνης και μεγάλων αραιώσεων δειγμάτων το οποίο είναι απαραίτητο για να ξεπεραστεί τυχόν παρεμβολή. |